Инструкцию 4 2 11-19-9 2004 паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов

Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов

Отбор проб и доставка кала в паразитологическую или клинико-диагностическую лабораторию

1. Кал после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г (объем около столовой ложки).

2. Помещают в чистую сухую, стеклянную или пластиковую посуду с крышкой.

3. Кал для обнаружения личинок стронгилоидеса, карликового цепня должен быть исследован в день дефекации, поэтому доставляется утренний кал.

4. С целью обнаружения вегетативных форм лямблий в "жидком стуле" время от дефекации до исследования должно быть по возможности сокращено до минимума (30 мин - 1,5 часа).

5. Для обнаружения цистных форм простейших (в том числе лямблий), а также яиц печеночных и кишечных гельминтов допускается хранение кала при температуре холодильника в течение суток.

6. При взятии проб кала в консервант Турдыева возможно хранение до 1 месяца.

Состав: 0,2% раствор азотистокислого натрия (0,16 г + 80 мл дистиллированной воды); глицерин; формалин концентрированный (аптечный); раствор Люголя основной (10 г йодида калия растворить в 30 мл дистиллированной воды, добавить 5 г кристаллического йода, размешать до полного растворения и долить до 100 мл дистиллированной водой). Раствор Люголя хранить в посуде из темного стекла.

Приготовление: 80,0 мл 0,2% раствора + 2,0 мл глицерина + 10 мл формалина + 8,0 мл раствора Люголя.

Смешивать в соотношении: 1 часть кала + 3 части консерванта.

1. Исследование фекалий

1.1. Макроскопическое исследование фекалий

Макроскопическое исследование фекалий применяется перед микроскопическим исследованием для выявления зрелых паразитов или их фрагментов: бычьего или свиного цепней, широкого и чаечного лентецов, остриц.

Необходимые реактивы и оборудование: глицерин, физиологический раствор, дистиллированная вода, химические стаканы, чашки Петри, черная бумага, пинцет, препаровальные иглы, предметные стекла большие (6х10; 8х12 см), лотки эмалированные, микроскоп, лупа типа МБС.

Фекалии сначала осматривают целиком, затем разводят дистиллированной водой до жидкой консистенции и небольшими порциями исследуют при хорошем освещении. Для лучшего просмотра применяют способ отстаивания:

1. Размешать фекалии в большом количестве воды в высоких стеклянных стаканах и поставить отстаивать.

2. Надосадочную жидкость слить, а осадок снова смешать с водой (так проделать несколько раз, пока надосадочный слой не станет прозрачным).

3. Отливать отдельные небольшие порции в чашки Петри и тщательно просматривать под стереоскопическим микроскопом МБС.

4. Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.

5. Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривать под микроскопом МБС между двумя предметными стеклами.

6. Мелких гельминтов рассматривать в капле глицерина или физраствора под микроскопом при увеличении : окуляр х7 или х10, объектив х8 или х10.

Необходимо помнить, что микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита.

Метод эффективен для дифференциальной диагностики половозрелых гельминтов кишечника (аскарид, остриц, члеников бычьего, свиного цепней, широкого и чаечного лентецов) от непереваренных частиц и других включений кала и идентификации найденных паразитов.

1.2. Микроскопические методы исследования фекалий

1.2.1. Метод нативного мазка с физраствором и раствором Люголя

Необходимые реактивы и оборудование: физиологический раствор, раствор Люголя 1%, предметные и покровные стекла, деревянные палочки, стеклянные пипетки, микроскоп.

Для обнаружения вегетативных форм лямблий (или других простейших) исследуют только неоформленные фекалии ("жидкий стул").

Фекалии исследуют сразу после дефекации (время можно увеличить до 1 часа, если сохранять фекалии при температуре 4-5°С).

Фекалии для данного исследования забирают без консервантов!

Физиологический раствор подогреть до 36-37°С.

Приготовление 1% раствора Люголя: к 5 мл основного раствора Люголя добавить 20 мл физраствора. Хранить в темной склянке не более 14 дней.

1. Нанести на предметное стекло 1 каплю теплого физраствора в левой половине и 1 каплю 1% раствора Люголя - в правой половине предметного стекла.

2. Немного фекалий перенести в каплю физраствора и растереть до получения равномерной негустой эмульсии, затем поместить немного фекалий в каплю раствора Люголя и также растереть.

3. Накрыть капли покровными стеклами и микроскопировать при увеличении: окуляр х10, объектив х40.

Метод позволяет выявлять вегетативные формы патогенных и непатогенных простейших и анализировать тип их движения (что имеет значение при видовой идентификации простейших).

Метод неинформативен для обнаружения яиц гельминтов!

1.2.2. Метод толстого мазка под целлофаном по Като

Необходимые реактивы и оборудование: 50% глицерин (100 мл глицерина + 100 мл дистиллированной воды), малахитовый зеленый - 3% раствор (2,5 г малахитовой зелени + 75 мл дистиллированной воды), целлофан гидрофильный, предметные стекла, палочки стеклянные или деревянные, специальный валик или резиновая пробка, микроскоп.

Подготовка рабочего раствора Като

1. 20 мл 50% глицерина + 1,2 мл 3% раствора малахитового зеленого. Раствор можно хранить длительное время в темной склянке с крышкой.

2. Из гидрофильного целлофана нарезать полоски по размеру предметного стекла (полиэтиленовая пленка непригодна для исследования).

3. Полоски поместить в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 часа.

1. На предметное стекло нанести фекалии (размером с небольшую горошину). Растереть индивидуальной палочкой.

2. Сверху накрыть целлофановой полоской, обработанной в растворе Като.

3. Притереть целлофан к стеклу с помощью специального валика или резиновой пробки до получения тонкого полупрозрачного слоя.

4. Препарат выдержать при комнатной температуре в течение 1 часа или в термостате при 37-40°С в течение 20-30 мин.

5. Микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов объектив х40).

Эффективность и информативность метода

Метод выявляет яйца печеночных и кишечных гельминтов при высокой и средней степени интенсивности инвазии, но малоинформативен при инвазиях низкой интенсивности. Не применяется для диагностики протозоозов.

1.2.3. Метод уксусно-эфирного осаждения

Необходимые реактивы и оборудование: водный раствор уксусной кислоты 5% (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл дистиллированной воды), этиловый эфир медицинский, раствор Люголя 1%, центрифужные градуированные пробирки, воронки стеклянные, металлические ситечки чайные или двухслойный бинт, предметные и покровные стекла, палочки деревянные или стеклянные, пипетки, резиновые пробки или специальный валик, центрифуга лабораторная, микроскоп.

1. В центрифужные градуированные пробирки налить 5 мл 5% раствора уксусной кислоты.

2. Добавить 1 г фекалий (такое количество, чтобы раствор в пробирке поднялся до уровня 6 мл).

3. Фекалии тщательно смешать с уксусной кислотой при помощи индивидуальной палочки, закрыть пробирку пробкой, интенсивно встряхнуть до образования однородной смеси и дать постоять несколько минут.

4. Процедить через воронку с металлическим ситечком или двухслойным бинтом в другую центрифужную пробирку, так чтобы в новой пробирке 6 мл раствора # (сполоснуть воронку с бинтом через который процеживали фекалии 5% уксусной кислотой).

5. Добавить в пробирку 4 мл эфира (до метки 10 мл), закрыть пробкой и энергично встряхивать 30 сек., держа при этом пробирку в горизонтальном положении, придерживая пробку пальцем, до получения эмульгированной смеси.

6. Смесь центрифугировать при 1500 об/мин в течение 2 мин.

7. После центрифугирования в пробирке различают 4 слоя: в верхней части пробирки эфирный экстракт, образовавшаяся "каловая пробка", раствор уксусной кислоты и на дне - небольшой осадок.

8. "Каловую пробку" палочкой отделить от стенок пробирки и вместе с надосадочной жидкостью вылить из пробирки так, чтобы на дне остался осадок. Излишки влаги и остатки "каловой пробки" удалить со стенок пробирки ватным тампоном.

9. Осадок нанести на предметные стекла, и просмотреть под микроскопом (в один из препаратов добавить 1 каплю 1% раствора Люголя). Микроскопировать вначале - при увеличении объектив х8 или х10, окуляр - х10, затем (для уточнения морфологии яиц и личинок гельминтов, а также для выявления цист простейших - объектив х40.

Эффективность и информативность метода

Применяется как универсальный метод для диагностики кишечных и печеночных гельминтозов и протозоозов, так как 5% раствор уксусной кислоты не оказывает деформирующего воздействия на яйца гельминтов, цисты и ооцисты простейших (однако не сохраняет стадии трофозоитов).

Метод эффективен при инвазиях с высокой, средней и низкой степенью инвазии. Однако, при низкой степени инвазии гельминтами рекомендуется сочетать с другим методом (например, с методом толстого мазка под целлофаном по Като).

Метод относится к количественным методам, так как позволяет подсчитать количество яиц гельминтов на 1 г фекалий.

2. Исследование дуоденального содержимого

Необходимые реактивы и оборудование: этиловый эфир, центрифуга, центрифужные пробирки, предметные стекла, пипетки, микроскоп.

Подготовка к работе: желчь в лабораторию должна быть доставлена сразу после зондирования. При подозрении на лямблиоз, стронгилоидоз исследуют порцию "А", исследование порций "В" и "С" более информативно на печеночные трематодозы.

В желчи, исследуемой сразу после зондирования, обычно обнаруживаются вегетативные подвижные формы лямблий и подвижные личинки стронгилоидеса. При исследовании желчи через несколько часов после зондирования (но в день забора материала) обычно подвижности личинок стронгилоидеса и вегетативных форм лямблий не наблюдается.

Исследование нативного мазка желчи.

1. Выбрать сгустки слизи, волокон, патологические примеси.

2. Стеклянной палочкой или пипеткой нанести тонким слоем желчь на предметное стекло.

3. Микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10, для уточнения морфологии яиц гельминтов и для исследования на простейшие - объектив х40.

Эффективность и применение метода

Метод позволяет исследовать подвижные личинки стронгилоидеса и подвижные вегетативные формы лямблий.

Метод неэффективен при исследовании на яйца трематод.

Исследование желчи с центрифугированием.

1. При наличии в желчи большого количества слизи или гноя взболтать все порции с равным количеством эфира.

2. Центрифугировать в центрифужных пробирках все порции не менее 20 мин при 1500-2000 об/мин.

3. Надосадочную часть желчи слить.

4. Осадок перенести на предметное стекло и микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10, для уточнения морфологии яиц гельминтов и для исследования на простейшие - объектив х40.

Эффективность и применение метода

Метод применяется для выявления яиц трематод (описторхи, дикроцелии, фасциолы), личинок стронгилоидеса, вегетативных форм лямблий.

Наиболее эффективно сочетание исследования желчи с центрифугированием и нативного мазка желчи.

Исследование желчи на яйца трематод эффективно только при центрифугировании.

> Алгоритм обследования пациентов на наличие паразитарных заболеваний

Содержание Методические рекомендации "Актуальные биогельминтозы и протозоозы в Западной Сибири (эпидемиология, биология, диагностика.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Комплексное лабораторное обследование для выявления основных гельминтозов и протозойных инфекций человека, включающее общеклинические и специфические тесты.

Анализы для диагностики гельминтозов и протозойных инфекций.

Синонимы английские

Laboratory diagnosis of protozoal and helminthic infections; CBC, Stool Ova and Parasites test, Cellulose tape test, Protozoal and Helminthic Serology.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, кал, отпечаток с перианальной области.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.
• Сбор биоматериала на исследование проводится только утром (до 10:00), до дефекации. Накануне взятия биоматериала не проводить туалет кожных покровов в области ануса и ягодиц.

Общая информация об исследовании

Гельминтозы и протозойные инфекции наблюдаются повсеместно и особенно распространены среди детей и людей, по роду деятельности контактирующих с домашними и дикими животными. Как правило, инфицирование человека является одним из этапов развития гельминтов или простейших. Многие из паразитов имеют фекально-оральный механизм передачи инфекции и по крайней мере на одном этапе жизненного цикла поражают различные отделы пищеварительного тракта. Несмотря на то что некоторые гельминтозы и паразитозы человека имеют специфические клинические признаки, в целом дифференцировать эти заболевания на основании клинической картины очень сложно. Основную роль в диагностике этих заболеваний играют лабораторные тесты. С учетом того, что у одного и того же человека может наблюдаться сочетание нескольких гельминтозов и паразитозов, рекомендуется выполнение сразу нескольких тестов или, что более удобно для врача и пациента, комплексного анализа на распространенные гельминтозы и паразитозы.

Комплексное лабораторное обследование включает общеклинические и специфические анализы на самые распространенные и важные в клиническом плане гельминтозы и протозойные инфекции. Общеклинические тесты: общий анализ крови, лейкоцитарная формула, анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших.

Общий анализ крови и лейкоцитарная формула используются для того, чтобы определить, является ли гельминтоз или паразитоз инвазивным, и также позволяет выявить возможные осложнения, связанные с инфекцией (анемию). Об инвазивности гельминтозов и паразитозов свидетельствует эозинофилия. Она характерна для амебиаза, эхинококкоза, описторхоза, токсокароза, трихинеллеза и аскаридоза (в фазу миграции личинок). Эозинофилия не характерна для кишечного аскаридоза, энтеробиоза и лямблиоза. Любая длительно текущая инфекция может приводить к развитию анемии (анемии хронического заболевания). Гельминтозы и паразитозы, протекающие с изъязвлением слизистой оболочки пищеварительного тракта (например, амебиаз), приводят к развитию железодефицитной анемии.

Анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших включают макроскопическую оценку кала (цвет, консистенция, наличие крови, избытка слизи, макроскопически определяемых паразитов), микроскопию нативного образца кала (наличие цист простейших – трофозоитов, личинок и взрослых особей гельминтов) и микроскопию окрашенного мазка кала (наличие цист и трофозоитов). Анализ кала на яйца гельминтов позволяет выявить большинство кишечных нематод, цестод и трематод. Анализ кала на цисты простейших позволяет выявить Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Balantidium coli и других простейших. Учитывая, что поступление яиц гельминтов или цист простейших в кал может носить непостоянный характер, однократное исследование кала малоинформативно - рекомендуется исследование трех образцов кала. Следует учитывать, что при некоторых гельминтозах (например, описторхоз) появление яиц в кале начинается только через 2-4 недели после возникновения симптомов заболевания. Отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

К специфическим тестам для диагностики гельминтозов и паразитозов относятся серологические тесты и анализ на энтеробоз.

Echinococcus, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю эхинококкоза (Echinococcus granulosus или Echinococcus multilocularis). Чувствительность серологических тестов в отношении E. granulosus при поражении печени (самая частая локализация) составляет около 80 %, при поражении других органов (легкие, головной мозг, кости скелета) – несколько ниже.

Opistorchis, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю описторхоза (Opistorchis felineus или Opistorchis viverrini). Из-за невысокой специфичности серологические тесты являются дополнительным способом диагностики описторхоза (главный тест – анализ кала на яйца гельминта).

Toxocara, IgG, титр - количественное определение специфических антител IgG к возбудителю токсокароза (Тохосаra canis). Серологические тесты обладают достаточно высокой чувствительностью (78 %) и специфичностью (92 %) и могут служить хорошим дополнением или даже альтернативой "золотому стандарту" диагностики данного заболевания - микроскопическому исследованию биопсии ткани, содержащей личинки гельминта (частая локализация – печень и легкие), учитывая, что многие пациенты с токсокарозом - маленькие дети.

Учитывая системный характер таких инфекций, как эхинококкоз, описторхоз и токсокароз, при подозрении на эти заболевания проводят дополнительные обследования, в том числе оценку функции печени.

Trichinella, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю трихинеллеза (Trichinella spiralis и родственные виды). Серологические тесты становятся положительными через 3 недели после инфицирования. Учитывая, что личинки гельминта поражают мышечную ткань, при данном заболевании также могут быть повышены следующие клинико-лабораторные маркеры: креатинкиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ).

Ascaris lumbricoides, IgG - определение специфических антител IgG к возбудителю аскаридоза. Аскаридоз – это самый распространенный гельминтоз человека. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики аскаридоза (главный тест – выявление взрослых особей в области рта и ануса, а также анализ кала на яйца гельминта).

Giardia lamblia, антитела - определение специфических антител к возбудителю лямблиоза. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики лямблиоза (главный тест - анализ кала на цисты паразита). Серологический тест становится отрицательным через 1 год после перенесенной инфекции. Также может быть использован тест на антиген G. lamblia в кале.

Энтеробиоз – распространенный гельминтоз, вызываемый Enterobius vermicularis (острица). Яйца остриц не выделяются с калом, поэтому микроскопическое или любые другие исследования кала не применяются. Лабораторная диагностика энтеробиоза осуществляется с помощью специального метода - микроскопического исследования мазков-отпечатков с кожи перианальной области. Микроскопическое исследование позволяет произвести дифференциальную диагностику энтеробиоза с аскаридозом, а также другими неинфекционными заболеваниями, сопровождающимися зудом перианальной области (контактным дерматитом, сахарным диабетом). Учитывая повышенную активность самки в ночные часы, оптимально производить мазок-отпечаток с утра, до совершения утреннего туалета.

Комбинация общеклинических и специфических тестов позволяет достичь наибольшей точности при диагностике гельминтозов и паразитозов. При эффективном лечении изменения, выявленные в общеклинических тестах, нормализуются, а яйца/личинки/взрослые особи гельминтов или цисты простейших перестают определяться, но серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики кишечных гельминтозов и протозойных инфекций.

Когда назначается исследование?

• При обследовании детей и людей из группы риска заражения гельминтами и простейшими (ветеринары, фермеры, работники, занятые в санитарно-гигиентической сфере);
• при наличии признаков глистной инвазии или протозойной инфекции: хронической диареи, мальабсорбции, тошноты, потери веса, а также признаков реакции гиперчувствительности (крапивницы и других сыпей);
• при оформлении ребенка в детский сад, лагерь, бассейн, при госпитализации.

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

В норме яйца, личинки и взрослые особи гельминтов, цисты и вегетативные формы простейших в кале отсутствуют. Их обнаружение свидетельствует о текущей инфекции.

Серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Что может влиять на результат?

• Время, прошедшее с момента заражения: яйца гельминтов и цисты простейших могут быть обнаружены через 2-4 недели и позже после заражения.
• Характер и скорость образования яиц гельминтов и цист простейших: часто наблюдается прерывистый характер их поступления в кал, что может привести к получению ложноотрицательного результата и обуславливает необходимость исследования трех, а не одного образца кала.



• Для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту;
• результат комплексного анализа следует интерпретировать с учетом анамнестических, клинических и инструментальных данных;
• отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, педиатр, инфекционист.

Основой диагностики паразитарных болезней, в частности гельминтозов, являются результаты лабораторных исследований, которые выявляют непосредственно возбудителей, их антигены или антитела к ним.

Гельминтозы развиваются в результате инвазии (заражения) организма окончательного хозяина (человека или животного), используемого как место обитания гельминтов и источника их питания. Часто болезни протекают без выраженных специфических клинических симптомов, что не всегда позволяет поставить диагноз по клинической картине.

Диагностика гельминтозов должна быть комплексной и основываться на данных эпидемиологического анамнеза, клиники заболевания и лабораторных исследований.

Специфика биологии каждого конкретного вида гельминта диктует необходимость различной тактики лабораторных исследований, которая направлена на обнаружение в одних случаях гельминтов или их фрагментов, а в других – их личинок, яиц или специфических иммуноглобулинов.

Материал для исследования берется в зависимости от подозрения на наличие у больного того или иного гельминтоза, так как пути выделения яиц, личинок или фрагментов паразитов из организма человека могут быть разными.

Для геогельминтов характерен кишечный (интестинальный) путь выделения яиц и личинок из организма больного человека. Большинство гельминтов, яйца которых выводятся через кишечник, паразитируют в пищеводе, желудке, кишечнике, а также попадают в кишечник при миграции через легкие, бронхи, трахеи, гортань, когда происходит заглатывание яиц и личинок со слизью при кашле. Этот путь присущ трематодам, цестодам и многим нематодам (в частности, геогельминтам). Материалом для исследования служат фекалии (кал). При исследовании проб фекалий обнаруживаются яйца и личинки многих гельминтов.

Паразитологические методы лабораторных исследований применяются:

• с диагностической целью;
• для контроля эффективности лечения;
• для оценки качества проведенного комплекса лечебно-профилактических мероприятий;
• для установления уровня пораженности населения (при профосмотрах)

Лабораторная диагностика является важным методом при паразитарных заболеваниях. В то же время качество лабораторной диагностики зависит от множества факторов, таких как надлежащая подготовка пациента к лабораторному обследованию, правильный забор материала для исследования и выбор оптимальной методики, квалификация и опыт специалиста-лаборанта.

Для верификации диагноза важно обеспечить следующее:

• сбор данных эпидемиологического анамнеза;
• определение соответствующего материала для исследования, правильно собранного и доставленного вовремя;
• выбор и применение соответствующего метода идентификации паразита;
• правильная идентификация паразита;
• правильная интерпретация результатов исследования.

Cбор материала для гельминтологических исследований включает следующие шаги:

1. Для исследования собирают фекалии из любой чистой емкости немедленно после дефекации.
2. Не допускается сбор образцов фекалий из унитаза.
3. Для детей возможен сбор образца с пеленки, подгузника или горшка.
4. Используя ложку в крышке контейнера, собрать не менее чем из трех точек стула.
5. Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после дефекации, а при подозрении на стронгилоидоз – немедленно.
6. Если по каким-либо причинам доставка в лабораторию затруднена, то необходимо хранить материал при температуре +4–8 °C. Рекомендуется использование консерванта, и тогда исследование можно проводить в течение 3–10 дней после дефекации.

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и опосредованные (косвенные).

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте и др.

Опосредованные (косвенные) методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, путем серологических реакций, общего исследования крови, мочи.

Основным методом лабораторной диагностики глистных инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтокопроскопические.

Гельминтокопроскопия – это совокупность методов взятия, обработки и исследования (макро- и микроскопического) проб фекалий человека с целью обнаружения в них яиц, личинок гельминтов, их фрагментов. Она включает следующие виды исследований:

• копроовоскопия (исследование фекалий на яйца гельминтов);
• копроларвоскопия (исследование фекалий на личинки гельминтов);
• макроскопия фекалий (обнаружение фрагментов или зрелых гельминтов в фекалиях).

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся метод нативного мазка и метод толстого мазка под целлофаном по Като – Кац.

Сложные методы, или методы обогащения, основаны на феномене разных удельных весов яиц гельминтов и применяемых реагентов. При обработке фекалий этими растворами происходит концентрация яиц на поверхности раствора или в осадке, в результате чего увеличивается эффективность поиска.

Различают следующие методы обогащения:

• флотационные (когда используют солевые растворы, удельный вес которых выше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они всплывают в поверхностную пленку, которую и исследуют);
• седиментационные (когда используют растворы, удельный вес которых меньше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они оседают, образуя осадок).

Методом седиментации возможно определить следующие гельминтозы: описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз, метагонимоз, нанофиетоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз, аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз, трихостронгилез, некатороз, шистосомоз, кишечные протозоозы (лямблиоз,криптоспоридиоз, изоспороз)

Специальные методы чаще всего необходимы для обнаружения личинок гельминтов. Группа специальных методов направлена на диагностику конкретного геогельминтоза, применяемый метод специфичен только для данного гельминта.

Модификация эфир-формалинового метода седиментации
одноразовыми системами для проведения копрологического исследования

С развитием паразитологии в лечебную практику стали применяться одноразовые системы для копрологического исследования, предназначенные для эффективного концентрирования яиц и личинок гельминтов модифицированным эфир-формалиновым методом.

Системы для копрологического исследования являются одноразовыми и состоят из нескольких элементов:

• пробирка для образца, в которую имеется готовая смесь для фиксации образца фекалий и последующей седиментации
• пробирка с системой фильтров и шпателем для забора образца;
• коническая емкость для сбора отфильтрованного материала.

Система фильтров способствует оседанию грубых частиц непереваренной пищи и клетчатки в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися в нее паразитами, яйцами паразитов под давлением фильтруется и центрифугируется в конической пробирке.

После получения взвеси систему помещают в центрифугу и центрифугируют при скорости 2500–3000 об/мин в течение 1–3 минут, при скорости 1500 об/мин – 5 минут. В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимися в нее яйцами гельминтов, цистами простейших. Отсоединяют модуль с фильтром и утилизируют после обеззараживания. Коническая часть пробирки остается для микроскопирования. Для этого из нижней части пробирки с помощью пипетки переносят на предметное стекло 2 капли пробы осадка. Микроскопируют при увеличении: окуляр x10, объективы x10, x40.

Преимущества использования одноразовых систем для копрологических исследований:

• повышает выявляемость возбудителей;
• уменьшает расход реагентов;
• снижает опасность контаминации, исключая контакт персонала с исследуемыми образцами;
• улучшает стандартизацию метода, повышает достоверность анализа;
• исключает подготовку и повторную обработку посуды, а также сокращает количество отходов в процессе проведения исследования