Диагностика пищевых отравлений микробиология
Пищевые отравления - острые системные заболевания, возникающие в результате приема в пищу продуктов, массивно обсемененных микроорганизмами или содержащих микробные экзотоксины. Пищевые отравления бактериальной природы подразделяются на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы (интоксикации), а также отравления смешанной этиологии.
Пищевые токсикоинфекции (ПТИ): острые кишечные заболевания с инфекционным воспалением кишечника, возникающие в результате употребления в пищу массивно обсемененных некоторыми бактериями продуктов.
Возбудители:
1. Условно-патогенные МБ:
ü семейства Enterobacteriaceae - E.coli, Proteus (P.vulgaris, P.mirabilis, Morganella morganii), Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella pneumoniae;
ü семейство Vibrionaceae - V.parahaemolyticus;
ü семейство Bacillaceae - B.cereus, C.perfringens серотипа А;
ü семейство Streptococcaceae - S.faecalis;
ü семейство Pseudomonadaceae - P.aeruginosa и др.
2. Энтеропатогены: энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, шигеллы (S.sonnei) и иерсинии (Y.enterocolitica)
Патогенез:
Прием пищи ® размножение МБ в тонком кишечнике ® проникновение в лимфоидный аппарат ® массовая гибель МБ с выделением эндотоксина ® поражение нервного аппарата кишечника и клеток ЦНС, сосудов, воспалительный процесс в кишечнике.
Клинические проявления:
Заболевание начинается внезапно с тошноты, рвоты, поноса, болей в животе и общих симптомов (головная боль, падение сердечной деятельности, вплоть до коллапса). По типу ПТИ могут протекать заболевания, вызываемые.
Диагноз устанавливается после выделения из исследуемого материала (испражнения, моча, рвотные массы, остатки пищи) соответствующего возбудителя.
Пищевые микробные токсикозы (интоксикации): острые заболевания, возникающие при употреблении в пищу продуктов, в которых в результате массивного размножения микробов содержится большое количество экзотоксина.
К ним относят ботулизм, токсикозы, вызванные стафилококковым энтеротоксином и токсинами микроскопических грибов.
Патогенез:
Обусловлен действием микробного экзотоксина, который не разрушается при кипячении, пищеварительными ферментами и кислым содержимым желудка.
Принципы диагностики:
1. Отравления часто носят групповой характер. Каждый случай подлежит обязательному санитарно-эпидемиологическому расследованию с целью установления причин заболевания и разработки мер ликвидации вспышки и профилактики. Расследование пищевых отравлений производится немедленно с участием санитарного врача по гигиене питания или главврача СЭС и врача-бактериолога.
2. Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, мочу, кровь, а также секционный материал (в случае летального исхода). Одновременно производят отбор остатков подозреваемой пищи.
3. Бактериологический метод: для постановки этиологического диагноза бактериологическое исследование одновременно ведут в нескольких направлениях: на облигатно-патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и вибрионы, стафилококки, стрептококки, бациллы, а также (по показаниям) - на обнаружение возбудителей и токсинов ботулизма.
При бактериологической диагностике ПТИ, вызванной условно-патогенными микробами, применяют количественный метод. Разведение материала засевают на чашки с дифференциально-диагностическими средами: Плоскирева, Эндо (Левина) - на энтеробактерии; ЖСА с полимиксином и триметилтетразолий хлоридом - на B.cereus; МПА с фурагином - на псевдомонады; щелочной агар - на вибрионы. При стафилококковом токсикозе производят посев на ЖСА.
При наличии роста колоний, подозрительных на патогенные энтеробактерии дальнейшие исследования ведут по их выделению и идентификации. При отсутствии роста облигатнопатогенных микробов изучают характер колоний УПМ на указанных средах. Определяют количество бактерий в 1 г материала. Выделяют чистые культуры и подвергают их идентификации и внутривидовому типированию.
Оценка результатов: выделение из материалов сальмонелл, шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек, иерсиний или других облигатнопатогенных микробов, независимо от количества, подтверждает соответствующее заболевание или носительство. Для оценки этиологической роли УПМ главным критерием является количественный. Этиологически значимо присутствие в материалах от больных и пищевых продуктах микробов в большом количестве (105-106 и более КОЕ в 1 г). При пищевых отравлениях диагноз становится более достоверным при одновременном обнаружении тех же микробов в больших количествах в пищевых продуктах, явившихся причиной заболевания. Этиологическую роль микроба подтверждает его повторное выделение из материала больного, идентичность штаммов возбудителя (по фаго- и сероварам) у большого числа больных при групповом пищевом отравлении, а также нарастание титра антител в динамике болезни.
Для диагностики пищевых токсикозов используют методы обнаружения в материалах от больных (рвотных массах, промывных водах) и в пищевых продуктах экзотоксинов микробов. При ботулизме с этой целью применяют биологическую пробу нейтрализации на белых мышах с антисыворотками к ботулотоксинам различных типов. При стафилококковом токсикозе используют РПГА с эритроцитами, обработанными содержащими экзотоксин материалами и типовыми стафилококковыми антисыворотками.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Применение реакции иммунофлуоресценции как экспресс-метода для обнаружения сальмонелл.
Реакция агглютинации для выявления антител с парными сыворотками больного по типу реакции Видаля. Для реакции используют диагностикум, живые лабораторные культуры и аутоштаммы.
Применение реакции пассивной гемагглютинации с использованием О-эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител и реакции Кумбса для обнаружения неполных антител.
Рисунок 2. Микроскопия колонии из посева испражнений, сделанного на прошлом занятии. Окраска по Граму.
Рисунок 3. Escherichia coli.
Рисунок 4. Salmonella enteritidis.
Рисунок 5. S. typhimurium.
Рисунок 6. S. choleraesuis. Морфология сальмонелл и кишечной палочки. Окраска по Граму.
Методы микробиологической диагностики пищевых отравлений, вызываемых стафилококками.
Материал: остатки пищи, рвотные массы, промывные воды, испражнения, смывы с предметов.
Б. Обнаружение стафилококковых энтеротоксинов: непрямой бактериологический, серологический и биологический методы.
В. Энтеротоксин на кошках определяют внутривенным введением материала. Полученный центрифугат или фильтрат стафилококковой культуры прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в вену уха или бедренную вену в количестве 0,5 мл на 1 кг веса. Наличие рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в сроки от 30 минут до 3 часов, указывает на присутствие энтеротоксина.
Контрольные вопросы:
В чем суть иммунофлуоресцентного метода диагностики брюшного тифа?
Какие микроорганизмы чаще всего вызывают пищевые токсикоинфекции?
Какие условия способствуют возникновению пищевых токсикоинфекций?
Какие сальмонеллы чаще всего оказываются возбудителями пищевых токсикоинфекций?
Каковы морфологические,тинкториальные, культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
Каковы особенности патогенеза пищевых токсикоинфекций?
Какие микробиологические методы используются для диагностики пищевых токсикоинфекций?
Что подлежит исследованию при пищевых токсикоинфекциях?
На какие питательные среды следует сеять материал при пищевых токсикоинфекциях?
Как производится идентификация сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
Как производится исследование пищевых продуктов на наличие условно патогенных микробов кишечной группы?
Как производится исследование пищевых продуктов на наличие стафилококка?
Как обнаруживается стафилококковый энтеротоксин?
Какие формы сальмонеллезов бывают у животных?
Каковы эпидемиологические особенности пищевых токсикоинфекций?
Каковы меры предупреждения пищевых токсикоинфекций?
Что такое спорадический сальмонеллез и каковы особенности его эпидемиологии?
Приложение к занятию 6.
Классификация пищевых отравлений.
| Пищевые отравления | |||
| Небактериального происхождения | Микробного происхождения | ||
| Интоксикация, или токсикозы | Токсикоинфекция | ||
| Возникают при употреблении продуктов, ядовитых по своей природе (грибы, ягоды, некоторые виды рыб), а также при попадании в организм ядовитых неорганических и органических веществ и ядохимикатов. | Бактериальной природы: отравление стафилококковым токсином. Возбудитель: Staphylococcus aureus | Грибковой природы, или микотоксикозы: например, алиментарно-токсическая алейкия. Возбудитель: Fusarium sporotrichiella | Возникают при попадании в организм живых бактерий, относящихся к следующим семействам: 1. Enterobacteria-ceae 2. Vibrionaceae 3. Streptococcaceae 4. Bacillaceae 5. Pseudomonadaceae |
ЗАНЯТИЕ 7.
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
(продолжение).
A. Микробиологический диагноз брюшного тифа и паратифов (окончание).
1. Агглютинация выделенной гемокультуры.
2. Учет результатов посева на среды "пестрого ряда".
3. Агглютинация культуры, выделенной из испражнений больного.
Б. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (продолжение).
1. Посев подозрительной колонии с дифференциально-диагностической среды на среда "пестрого ряда" и МПА для выделения чистой культуры и изучения ее биохимических свойств.
B. Микробиологический диагноз дизентерии.
1. Изучение морфологии и биохимических свойств дизентерийных
бактерий.
2. Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева.
A. Микробиологический диагноз брюшного тифа и паратифов (окончание).
§ 1. Поставить на стекле реакцию агглютинации выросшей на скошенном МПА культуры с монорецепторными адсорбированными 0- и Н-сыворотками, учтя предварительно ее биохимические свойства (среда Рапопорт). При отрицательной реакции агглютинации с 0-сывороткой необходимо поставить реакцию агглютинации с Ви-сывороткой. Результаты реакции зарегистрировать в тетради.
§ 2,3. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными 0- и Н-сыворотками, принимая во внимание биохимические свойства выделенной культуры. Результаты зарегистрировать в тетрадь.
Б. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (продолжение).
§ 1. Произвести макро- и микроскопическое исследование подозрительных колоний (бесцветные, прозрачные). Посеять подозрительную колонию на скошенный МПА и среды "пестрого ряда".
B. Микробиологический диагноз дизентерии.
§ 1. Приготовить препараты-мазки из чистых культур дизентерийных бактерий, окрасить по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства дизентерийных бактерий по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда". Обратить внимание на рост дизентерийных бактерий и кишечной палочки на среде Ресселя.
Регистрация результата роста культуры на среде Рапопорт.
Рисунок 1. Реакция О–агглютинации.
Рисунок 2. Реакция Н-агглютинации.
Рисунок 3. Реакция Ви-агглютинации.
Регистрация результатов биохимической активности корпускулы.
| Куль-тура | Глюко-за | Лакто-за | Ман-нит | Саха-роза | Индол | Моло-ко | Серово-дород | Среда Пешкова |
Реакция агглютинации выделенной от больного культуры.
§ 2. Произвести посев испражнений больного дизентерией на чашки с дифференциально-диагностической средой Плоскирева. Бактериальной петлей каплю испражнений нанести на пластинку бактоагара Плоскирева и тщательно рассеять штриховым способом на половине чашки (1 чашка дается на двух студентов).
Контрольные вопросы.
Какие микроорганизмы являются возбудителями дизентерии?
Какие принципы используют для классификации возбудителей дизентерии?
Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам?
Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Зонне?
Каковы особенности антигенного строения бактерий вида флекснера?
По каким признакам бактерии вида флекснера подразделяются на серовары и подсеровары?
Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Бойда?
Каковы особенности патогенеза дизентерии?
Какие микробиологические методы используются для диагностики дизентерии?
Какой материал исследуется для выделения возбудителей дизентерии и на какие питательные среды его засевают?
Где в организме больного локализуется возбудитель дизентерии?
Как следует брать материал от больного дизентерией?
Рисунок 5. Возбудитель пищевой токсикоинфекции со среды Плоскирева. Окраска по Граму.
Рисунок 6. Shigella sonnei. Окраска по Граму.
Рисунок 7. Shigella flexneri. Окраска по Граму.
Пищевые отравления бактериальной природы делятся на:
- токсикозы бактериальные и микотоксикозы,
Токсикоинфекции - пищевые отравления, вызванные условно-патогенными возбудителями (кишечная палочка, палочка протея, энтерококки, спороносные бактерии, солелюбивые бактерии) и малоизученными возбудителями (цитробактер, гаффния, клебсиелла и др.).
Обычно пищевая токсикоинфекция проявляется признаками гастроэнтерита ( через 6—12 ч после употребления пищи ( жидкий (водянистый) стул, ощущение тошноты, рвота, головная боль, боли в околопупочной области;
Вскоре появляются симптомы общей интоксикации: повышение температуры до 38—39 °С, боли в мышцах, ослабление сердечной деятельности.
Этот симптомокомплекс обусловлен совместным действием живых возбудителей и высвобождающихся в организме человека в результате их гибели токсичных веществ (эндотоксинов).
Для возникновения вспышки пищевой токсикоинфекции необходимы следующие условия:
- инфицирование пищевого продукта соответствующими микробами;
- недостаточная термическая обработка продукта, при которой сохраняются жизнеспособные формы микроорганизмов;
- нарушение условий хранения и сроков реализации пищевых продуктов или готовых блюд, ведущее к массивному размножению в них микрофлоры.
Наиболее часто пищевые токсикоинфекции связаны с употреблением мясных, рыбных, овощных блюд (вареные и ливерные колбасы, студни, заливное, пироги с мясной начинкой, салаты и пр.) — изделий, обычно не подвергающихся повторной тепловой обработке.
Источниками пищевых токсикоинфекций могут являться люди и животные, загрязняющие микробами окружающую среду (воду, посуду, продукты, оборудование, транспорт и т.д.).
Вспышки пищевых токсикоинфекций чаще происходят в период с июня по октябрь вследствие высоких летних температур, благоприятствующих размножению бактерий и проведения большого количества массовых мероприятий (выпускные, свадьбы и т.д.),
Бактериальные токсикозы - пищевые отравления, вызванные токсинами стафилококка, ботулизма и патогенных грибов (микотоксикозы).
Стафилококковые отравления возникают в случаях массивного обсеменения продукта стафилококками, выделяющими в него энтеротоксин (экзотоксин), который отличается теплоустойчивостью, так как выдерживает кипячение в течение нескольких десятков минут.
Инкубационный период этого отравления составляет 2—4 ч, затем появляются явления острого гастрита, могут быть незначительное повышение температуры тела, сердечная слабость, понос отмечается не всегда.
Продуктами, опасными с точки зрения возникновения стафилококкового токсикоза, являются изделия из крема, молочные продукты, рыбные консервы в масле.
Источниками инфицирования продуктов стафилококками могут быть люди с гнойно-воспалительными процессами на руках или катаральными явлениями в носоглотке, а также животные с больным выменем (мастит у коров). Поэтому лица с гнойничковыми заболеваниями на руках (панариций и др.) и воспалительными заболеваниями носоглотки (ангина, ОРЗ, ОРВИ, ларингит и т.д.) должны быть отстранены от работы, связанной с приготовлением пищи, или контакта с пищевыми продуктами. Необходим также санитарно-ветеринарный контроль за животными на молочных фермах.
Ботулизм вызывается сильнодействующим токсином, который образуется в пищевом продукте, инфицированном палочкой ботулизма.
Для возникновения этого токсикоза необходимы следующие условия:
- загрязнение пищевого продукта почвой или содержимым кишечника при разделе туш, в которых содержатся вегетативные или споровые формы палочки ботулизма;
- благоприятные условия для прорастания спор, размножения вегетативных форм и накопления ботулотоксина (анаэробные условия, температура от 10 до 30 °С и длительное хранение продукта);
- отсутствие термической обработки продукта, в котором уже образовался токсин (токсин полностью разрушается после 30-минутного кипячения);
- нейтральная или слабокислая среда в продукте (при pH 4,4 и ниже размножение палочки ботулизма прекращается).
Источником ботулизма чаще всего являются продукты, подлежащие длительному хранению: баночные консервы, копченые колбасы, окорока, красная рыба (балык холодного копчения), обсемененные ботулотоксином.
Абсолютное большинство случаев ботулизма (до 90 %) связано с употреблением продуктов домашнего консервирования, получившего в последние годы значительное распространение: соленых грибов в герметически укупоренных банках, вяленой и копченой рыбы, овощных и плодовых баночных консервов, колбасы, сырокопченого окорока, балыка и т.д.
Клиническая картина ботулизма отличается от других пищевых отравлений. Диспепсические явления отмечаются редко. На первое место выступают симптомы поражения бульбарного отдела центральной нервной системы: двоение в глазах, косоглазие, сухость во рту, затруднение речи, нарушение глотания. Температура тела, как правило, не повышена, но отмечается учащение пульса (тахикардия). Смерть наступает от паралича дыхательного центра.
Своевременное введение поливалентной противоботулинической сыворотки спасает жизнь больного.
Микотоксикозы -это пищевые отравления, вызываемые токсинами патогенных грибов, поражающих злаковые культуры на корню или зерно при неблагоприятных условиях хранения.
- фузариотоксикозы (алиментарно-токсическая алейкия и отравление "пьяным хлебом"),
- афлатоксикоз и некоторые другие.
Эрготизм развивается при употреблении зерновых продуктов из муки, содержащей примесь спорыньи. Спорынья — это склероции микроскопического гриба Claviceps purpurea, поражающего колосья ржи и, реже, пшеницы, вырабатывающего различные алкалоиды, обладающие токсическими свойствами. Эрготизм протекает в судорожной и гангренозной формах.
Алиментарно-токсическая алейкия, или септическая ангина— тяжелое заболевание, развивающееся при употреблении хлеба из перезимовавших в поле злаковых культур, пораженных грибами рода Fusarium. Наступает резкое нарушение кроветворения, затем развивается остропротекающее септическое заболевание с токсической ангиной и кровоизлияниями в коже.
Отравление "пьяным хлебом" возникает в результате употребления изделий из зерна, пораженного микроскопическим грибом Aspergillus flavus, который поражает злаки в период роста, в снопах, особенно при дождливой погоде, а также в зернохранилищах при увлажнении и плесневении зерна. Клиническая картина отравления сходна с алкогольным опьянением, характеризуется эйфорией (смех, пение, возбуждение) и нарушением координации движений. В дальнейшем появляются депрессия и упадок сил. При длительном использовании зараженного хлеба могут развиться анемия и психические расстройства.
Афлатоксикозы — микотоксикозы, вызываемые афлатоксинами В1, В2, G1, G2, М1, которые продуцируют в основном грибы рода Aspergillusjlavus. В малых концентрациях они обладают канцерогенным действием, вызывая первичный рак печени, а в больших — поражения печени в виде некроза и жирового перерождения.
Поражаются этим грибом злаки и орехи (арахис) при неправильных условиях хранения.
Профилактика пищевых отравлений бактериальной природы:
Читайте также:
|
Среди пищевых отравлений, вызванных различными причинами (например, попаданием в организм ядовитых растений, грибов или некоторых химических веществ), отравления бактериальной природы встречаются в 65-90% случаев и имеют наибольшее значение.
Пищевые отравления бактериальной этиологии – это заболевания, возникающие в результате употребления пищи, массивно обсемененной бактериями определенных видов или содержащей токсичные для человека вещества микробного происхождения. Источники пищевых отравлений – люди и животные (больные или носители возбудителя). От них возбудители попадают в пищевые продукты, где происходит их размножение и одновременное накопление токсинов. Размножение возбудителей становится возможным при нарушении санитарных норм во время заготовки продуктов или в процессе приготовления из них полуфабрикатов и готовых изделий. Оно может произойти также в результате нарушения правил транспортировки и последующего хранения продуктов. Пищевые отравления не передаются непосредственно от больного здоровому человеку, и этим они отличаются от инфекционных болезней.
В соответствии с современной классификацией, пищевые отравления микробной этиологии в зависимости от причин, их вызвавших, подразделяются на 3 группы: пищевые токсикоинфекции; пищевые токсикозы (интоксикации); пищевые отравления смешанной этиологии (пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы).
Пищевые токсикоинфекции– острые заболевания, возникающие при употреблении пищи, содержащей большое количество (10 6 -10 8 и более в 1г или 1 мл) живых условно-патогенных микроорганизмов или токсинов, выделяющихся при их размножении или гибели.
Наиболее частыми возбудителями пищевых токсикоинфекций являются: E.coli, Bac.cereus, Proteus spp., Cl.perfringens, Str.fecalis, V.paranaemolyticus. Реже заболевание вызывается представителями родов: Pseudomonas, Klebsiella, Enterobacter.
Клинически пищевые токсикоинфекции характеризуются коротким инкубационным периодом (1-48 часов), острым внезапным началом и такими симптомами, как тошнота, рвота, боли в животе, диарея. Течение заболевания в большинстве случаев доброкачественное, и через 3 суток наступает улучшение состояния. Обычно заболевает сразу несколько человек, употреблявших один и тот же пищевой продукт.
Пищевые токсикозы (интоксикация) возникают в тех случаях, когда в пищевом продукте активно размножаются возбудители отравления и вырабатывают токсические вещества, не разрушающиеся при кулинарной обработке. При употреблении в пищу таких продуктов картина возникающего заболевания бывает связана только с действием ядов микробного происхождения, а размножение в организме самих возбудителей не имеет значения. К пищевым бактериальным токсикозам относятся: ботулизм (возбудитель Cl.botulinum); стафилококковые интоксикации (возбудитель-Staph.aureus); микотоксикозы (возбудителями являются некоторые виды микроскопических грибов).
Наиболее тяжелой клинической картиной отличается ботулизм. Ботулинический экзотоксин выделяется бактериями в анаэробных условиях. Заражение чаще всего происходит при употреблении в пищу консервированных продуктов (овощных, грибных, мясных), особенно, если они были заготовлены в домашних условиях. Клинические проявления при отравлении: тошнота, рвота, диарея; позже появляются признаки поражения зрительных нервов (расстройство аккомодации, двоение в глазах). Возможны нарушение глотания, потеря голоса, что связано с параличом мышц гортани. Может наступить внезапная смерть от остановки сердца. При благоприятном исходе заболевания выздоровление наступает медленно, при постепенном улучшении состояния. У выздоравливающих длительное время (до 1,5 месяцев) держатся остаточные явления параличей.
Пищевые отравления смешанной этиологии обусловлены совместным действием двух и более возбудителей или их токсинов.
Каждый случай пищевого отравления подлежит обязательному расследованию с применением бактериологического метода для установления его причины и проведения необходимых противоэпидемических мероприятий. Работники лечебно-профилактических учреждений, оказывающие помощь пострадавшим при подозрении на пищевое отравление, обязаны немедленно поставить в известность об этом территориальные органы Госсанэпиднадзора и направить туда для исследования пробы пищевых продуктов, патологический материал, взятый от больных.
При осуществлении лабораторной диагностики пищевых отравлений бактериальной этиологии, учитывая, что нередко клиническая картина заболевания бывает недостаточно типичной, требуется придерживаться следующих принципов:
- исследовать максимально широкий набор материалов, предположительно имеющих отношение к причине отравления;
- проводить одновременно поиск всех возможных в данной обстановке возбудителей, а также микробных токсинов;
- рекомендуется использовать максимально широкий набор питательных сред и посевы инкубировать при условиях, благоприятных для каждого из возможных возбудителей пищевых отравлений;
- выделенные культуры микробов подлежат обязательному детальному изучению и типированию;
- заключительным этапом работы должно быть обязательное сопоставление результатов, полученных при исследовании различных материалов.
Наиболее достоверными являются выводы о причинах пищевого отравления, подтвержденные тождеством возбудителей, обнаруженных в разных исследованных пробах.
Объектами лабораторного исследования могут быть:
- остатки подозреваемой пищи, употребляемой заболевшими, а также исходные продукты и полуфабрикаты, использованные для приготовления пищи (отбор проб производится в стерильные широкогорлые банки с притертыми пробками, либо закрытые пергаментной бумагой);
- суточные пробы готовой пищи при обязательном их хранении на холоду (их направляют на исследование непосредственно в той посуде, в которой они хранились);
- рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, моча, желчь пострадавшего человека;
- кровь больного для получения гемокультуры и для постановки серологических реакций;
- слизь из зева и носа, выделения гнойничковых поражений кожи персонала, занятого приготовлением пищи;
- смывы и соскобы с поверхностей инвентаря, посуды, рук персонала;
- при летальных исходах – содержимое желудка, отрезок тонкого кишечника, кровь из сердца, желчь, мезентеральные лимфатические узлы.
В лабораторию пробы должны доставляться в опечатанном виде, с соответствующими сопроводительными документами.
Исследование необходимо начинать немедленно после доставки проб, при невозможности этого допускается хранение проб при 4-6 о С не более 1 суток.
При диагностике пищевых отравлений используют следующие методы:
- бактериоскопический (определение морфологических и тинкториальных свойств возбудителей);
- бактериологический (выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация);
- серологический (обнаружение соответствующих антител в сыворотке крови больных);
- биологический (определение вида и типа токсина (в основном стафилококкового и ботулинического) в реакции нейтрализации с использованием экспериментальных животных).
Расследование причин бактериальных пищевых отравлений осуществляется в несколько этапов:
1-й ЭТАП (1-й день исследования)
Из исследуемого материала делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Одновременно осуществляется подготовка доставленных проб к исследованию: навеску твердого или полужидкого материала массой 25-30г гемогенизируют в 0,1% пептонной воде в соотношении 1:10; жидкий материал разводят в такой же пропорции без предварительной обработки (за исключением рвотных масс и продуктов, имеющих кислую реакцию – их нейтрализуют 10% раствором бикарбоната натрия). Затем проводят разведения полученного гомогената пищевого продукта в 0,1% пептонной воде от 10 -1 до 10 -10 . Жидкий патологический материал исследуют и в разведениях от 10 -1 до 10 -4 . Подготовленные разведения засевают мерными пипетками по 0,1мл в чашки Петри и растирают шпаделем по поверхности плотной питательной среды. С целью выявления стафилококка высев производят на желточно-солевой агар и в солевой бульон; для обнаружения сальмонелл – на висмут-сульфитную среду и в селенитовый бульон; для выращивания клостридий ботулизма применяют среду Китта-Тароцци; клостридий перфрингенс – среду Вильсон-Блера. Для первичного посева обязательно используют среды Эндо, Левина, Плоскирева (на случай роста энтеробактерий и парагемолитического вибриона). Целесообразно использовать также молочно-ингибиторную среду. Для обнаружения протея посев производится в конденсат в пробирки со скошенным агаром (по Шукевичу). Посевы инкубируют при температуре 37 о С в течение 18-24 часов, анаэробы выращивают 48 часов.
Одновременно с посевами на питательные среды в 1-ый день исследования проводят биологические пробы на животных с целью выявления наличия токсина в исследуемом материале и определения его вида и типа.
Так, при подозрение на отравление стафилококковой этиологии ставят пробу на 1-2,5 – месячных котятах: животным скармливают подозрительный продукт, и при наличии в нем стафилококкового энтеротоксина у них наблюдается типичная клиническая картина пищевого отравления: (рвота и диарея); позже животные выздоравливают. В более отдаленные сроки исследования, когда уже выделена чистая культура стафилококка, аналогичную пробу ставят с фильтратом выделенной культуры, который смешивают с каким-либо пищевым продуктом, например, со сметаной.
Присутствие в исследуемом материале ботулинического токсина и тип этого токсина (А, В, С, Е, F), определяют в реакции биологической нейтрализации на белых мышах.
2-й ЭТАП (2 – 3-й день) – продолжение исследований, начатых накануне:
- изучают культуральные свойства у выделенных микроорганизмов, подсчитывают число колоний, выросших на плотных питательных средах и производят перерасчет с целью определения концентраций микробов в 1г (1мл) исследуемого материала;
- осуществляют ориентировочное определение их родовой (видовой принадлежности). Чистые культуры микроорганизма пересевают на новые питательные среды: стафилококки – с желточно-соловего агара на скошенный агар для накопления чистой культуры, необходимой для последующего ее изучения; грамотрицательные бактерии -–со среды Эндо на среду Олькеницкого или на среды Гисса.
При появлении после первичного посева на молочно-ингибиторной среде с добавлением полимиксина и ТТХ (трифенилтетразолия хлорида) характерного роста энтеробактерий (мелких ярко-красных колоний, окруженных зоной просветления за счет протеолиза на светло-голубом фоне среды), делают высев на скошенный агар.
Возбудители ботулизма пересевают со среды Китта-Тароцци на кровяной агар Цейсслера. Характерные черноватые колонии клостридий перфрингенс, выросшие на среде Вильсон-Блера, пересевают на среду Китта-Тароцци и лакмусовое молоко. Из бесцветных на висмут-сульфитном агаре колоний парагемолитического вибриона производят высев на МПА, содержащий 3% поваренной соли.
3-й ЭТАП (3-4-й день исследования) – видовая идентификация и внутривидовое типирование микроорганизмов.
У выросших культур вновь изучают морфологические и культуральные свойства; у них исследуют биохимическую активность; проводят фаготипирование. У стафилококков исследуется плазмокоагулазная активность; у энтерококков определяется каталазная активность и устойчивость к 40% желчи. Выделенные сальмонеллы подвергаются серотипированию с монорецепторными сыворотками.
4-й ЭТАП (4-5-й день исследования) – обобщаются данные, свидетельствующие об этиологической роли выделенного микроорганизма и его количественном содержании в продукте (10 6 и более КОЕ в 1г или 1мл). О том, что выделенные микробы являются возбудителями пищевого отравления говорят следующие факты:
- идентичность штаммов, выделенных из остатков пищи и патологического материала;
- исчезновение после выздоровления больного монокультуры условно-патогенного микроорганизма, выделенного в начале заболевания;
- нарастание титров специфических антител, выявляемых серологическими реакциями.
В заключение проводится сопоставление данных лабораторного исследования с клиническими симптомами и данными эпидемиологического анализа.
При установлении диагностической роли того или иного микроорганизма учитываются следующие критерии.
О стафилококковой этиологии пищевого бактериального отравления свидетельствует:
- массивность обсеменения исследуемого материала (10 6 КОЕ/мл и более) грамположительными кокками, гроздъевиднорасполагающимися в мазках;
- плазмокоагулазная активность выделенных кокков;
наличие стафилококкового энтеротоксина в исследуемых продуктах и других материалах;
- идентичность фаготипов стафилококков, выделенных из остатков пищи, патологического материала, взятого от больного, в смывах с предметов обихода.
При диагностике ботулизма большое значение придается обнаружению в исследуемых пробах крупных грамположительных палочек с терминально расположенными спорами; выявлению ботулотоксина в исследуемом материале при постановке реакции нейтрализации на белых мышах.
Отравление клостридиями перфрингенс констатируется при обнаружении в пробах крупных грамположительных спорообразующих палочек и выявлении в них экзотоксина возбудителя в реакции нейтрализации. Несомненно, важным критерием является выделение типичного возбудителя из крови больного. Обращает на себя и массивность обсемененность исследуемых продуктов.
Сальмонеллы – грамотрицательные подвижные палочки, на висмут-сульфитном агаре образуют колонии черного цвета. Ферментируют глюкозу, не ферментируют лактозу, сахарозу, мочевину, образуют сероводород. Решающее значение в идентификации имеют результаты серотипирования с групповыми и типовыми специфическими сыворотками. В некоторых случаях удается выявить в сыворотке крови переболевших специфические антитела.
Кишечные палочки – также грамотрицательные подвижные бактерии. При культивировании на среде Эндо образуют колонии малинового цвета с металлическим блеском. Ферментируют многие сахара, в том числе лактозу, сахарозу. Большое значение имеет выраженная обсемененность исследуемых проб и выделение одних и тех же сероваров возбудителя из подозреваемого продукта и из патологического материала пострадавшего.
Установление протейной этиологии пищевого отравления основывается на обнаружении ползучего роста при посеве по Шукевичу; при микроскопии мазков, окрашенных по Граму (грамотрицательные палочки).
О диагностической роли энтерококков в пищевых отравлениях свидетельствуют данные микроскопического исследования, устанавливающие наличие грамположительных кокков, располагающихся в мазке в виде цепочек, а также своеобразные культуральные свойства: характерный рост на молочно-ингибиторной среде с полимиксином и ТТХ – в виде мелких красных, окруженных зоной просветления на светло-голубом фоне, среды. Выделенные микроорганизмы обладают устойчивостью к 40% желчи и 6,5% раствору поваренной соли.
В тех случаях, когда пищевое отравление вызвано парагемолитическими вибрионами, в исследуемых пробах при микроскопии мазков обнаруживаются грамотрицательные полиморфные изогнутые подвижные палочки. Они хорошо растут на средах, содержащих 6% поваренной соли.
В заключение следует еще раз подчеркнуть важность правильного и своевременного проведения микробиологической диагностики пищевых отравлений бактериальной природы.
Лабораторная диагностика, определяющая этиологию пищевого отравления, способствует своевременному назначению рациональной терапии, более раннему выздоровлению больных. Она позволяет ликвидировать вспышку заболевания в короткие сроки и своевременно устранить вызвавшую его причину.
Читайте также:
